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ELISA实验前的准备
点击次数:111 发布时间:2019-04-01

ELISA实验前的准备

1,仔细阅读说明书

2,承认试剂盒在有效期内

3,按说明书承认全部试剂完全(数量、体积)

4,标本制备要标准,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,留意低温保存

5,准备好全部实验额定所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等

6,根据检测标本数量承认所需试剂的量

7,按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂 DIY夹心法ELISA常见技能攻略

8,选择抗体时选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗,有必要辨认不同表位的抗体;好从同一家公司选择抗体对。

9,ELISA实验中为了承认佳信号和最低布景应将捕获抗体(0.5-4μg/ml)和检测抗体(0.25-2μg/ml)在预实验中进行彼此相抗的滴定。一起,应包括在恰当规划内的标准品的系列稀释。按试剂说明书惯例提供的规划进行操作。

10,标准品的配制:对于每种细胞因子应仔细阅读说明书,留意每批的细节。在运用细胞因子前,瞬时离心试剂瓶,尽可能多地收回其间的细胞因子。根据每批说明书中的细节,将冻干的细胞因子复溶。

11,一般待测抗原标准曲线的线性规划的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改动酶底物系统可在必定规划内提高灵敏度。

12,为了优化灵敏度,建议过夜孵育标准品和标本。

13,若运用过氧化物酶作为显色系统,应制止在洗液和稀释液中加叠氮钠,叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。

14,当测定混合液体中的抗原时,如血清,建议在标本稀释液中加不相干的Ig.

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